पॉलीआक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी खबरदारी

· पॉलीक्रिलामाइडजेल ry क्रिलामाइड मोनोमर, पॉलिमरायझेशन प्रारंभिक सामग्री, उत्प्रेरक आणि मीठ आणि बफर मिश्रणाचा उजवा एकत्रितपणे आवश्यक आहे.

· अ‍ॅक्रिलामाइडआणि बीआयएस (एन, एन '- मेथिलीन डबल ry क्रिलामाइड) मोनोमर फॉर्म जेल मॅट्रिक्स आहे.

· अमोनियम पर्सल्फेट चिकट पॉलिमरायझेशन प्रक्रिया प्रारंभ करा. गोंद तयार करण्यासाठी पाण्यात तयार केलेले 10% अमोनियम पर्सल्फेट सोल्यूशन आवश्यक आहे. बर्‍याच माहितीने सक्रिय वापराची आवश्यकता दर्शविली. तथापि, क्रियाकलाप नष्ट होण्याशिवाय 10% समाधान कित्येक आठवड्यांसाठी 4 ℃ वर ठेवता येते. 10 मिली पर्यंत तयार करा आणि जेव्हा गोंद एकत्रित होण्यास अपयशी ठरते तेव्हा टाकून द्या.

टीपः टक्केवारीअ‍ॅक्रिलामाइडसिक्वेंसींगमध्ये गोंद आणि प्रथिने गोंद सारखा नाही. प्रीडेड ry क्रिलामाइड: बीआयएस सोल्यूशन वापरत असल्यास, योग्य बाटली मिळण्याची खात्री करा.

· टेम्ड (एन, एन, एन ', एन'- टेट्रॅमेथिल इथिलेनेडिआमाइन) रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवलेल्या तपकिरी बाटलीमध्ये एक उत्प्रेरक आहे. गोंद ओतण्यापूर्वी जोडा.

E इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये वापरलेल्या पॉलीक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसीस प्रत्येक वेळी आणि नंतर धुतले पाहिजेत. इलेक्ट्रोफोरेसीस नंतर, गरम साबणाच्या पाण्यामध्ये मऊ ब्रश आणि कपड्याने धुवा, डिस्टिल्ड पाण्याने स्वच्छ धुवा आणि कोरडे उभे रहा.

· ओलावा आणि धूळ पोकळ पॉलिमरमुळे होऊ शकते. इलेक्ट्रोफोरेसीसच्या आधी, ग्लास क्लीनरने काचेची प्लेट स्वच्छ करा आणि मऊ ब्रशने पुसून टाका. डिस्टिल्ड पाण्याने धुवा आणि कागदाच्या पुसून नख कोरडे करा. कागदासह पुसण्यापूर्वी 70% इथेनॉलसह स्वच्छता केल्याने कोरडे स्वच्छ आणि वेगवान होण्यास मदत होते. Ry क्रिलामाइडचे नमुने यशस्वीपणे जोडा: बीआयएस, पाणी, बफर सोल्यूशन, अमोनियम पर्सल्फेट, टेमड. चांगले हलवा आणि लगेच घाला.

पॉलिमरायझेशनपूर्वी पॉलीक्रॅलिमाइड डीगॅस करणे आवश्यक नाही. (Ry क्रिलामाइड फुगे काढण्यासाठी व्हॅक्यूममध्ये ठेवला जात असे कारण ऑक्सिजन पॉलिमरायझेशनला प्रतिबंधित करते.)

क्षैतिज गोंद बिंदू नमुना टिप्स.

The अधिक स्पष्टपणे पाहण्यासाठी काही नमुना छिद्र करण्यासाठी तळाशी बॉक्समध्ये काळ्या कागदाचा तुकडा, काळ्या पार्श्वभूमीवर ठेवा.
· कोलोइडच्या अगदी वर गोंद टाकीने भरलेले बफर.
The जर काठावर हलका असेल तर दिवे चालू करा, लाईट चमकू कोलाइड द्या. नमुना पिपेटमध्ये काढा.
Uptatic स्वयंचलित पाइपेटिंग डिव्हाइस वापरणे.
10 10-200 मध्ये एमयू 1 लिक्विड मूव्हिंग पॉईंटचा वापर नमुन्यावरील बर्‍याच बिंदूंमध्ये केला जाऊ शकतो. अगदी लहान नमुना छिद्रांसाठी (10μ1 पेक्षा कमी), सिक्वेंसींग ग्लूसाठी वापरलेले लांब पिपेट हेड अधिक सोयीस्कर आहे.

· पाइपेटिंग फक्त नमुन्यात बुडलेले, हळूहळू हलणारे द्रव श्वास घेते. नमुना ग्लिसरीनसह चिकट दिसू शकतो आणि वेगवान पंपिंगमुळे पाईपेटच्या डोक्यात हवेचे फुगे काढू शकतात.

Pip पाईपेटिंग डोके इनहेलिंगनंतर नमुने, पाईपच्या काठावर हळूवारपणे द्रवपदार्थ हलवेल किंवा थेंबाच्या बाहेरील द्रव डोक्यावर पुसून टाकतील. नमुना चोखू नये म्हणून सावधगिरी बाळगा.

नमुना भोक मध्ये नमुना ठेवा

· पाइपेटिंग डिव्हाइस थोडा दबाव ठेवण्यासाठी, नमुने किंचित ओव्हरफ्लो लिक्विड हेड हलवा.
Pip स्पॉट होलपेक्षा किंचित जास्त, बफरमध्ये पाइपेटिंग हेड घातले गेले, सकारात्मक दबाव राखला. पिपेटची टीप एका लहान छिद्रात घातली जाऊ शकते.
· हळू आणि हळू हळू नमुने बाहेर. पिपेट टीप पॉईंट सॅम्पल होलच्या वर ठेवली आहे आणि नमुना भोकात बुडेल. नमुना भोक आत येण्याऐवजी भरण्यासाठी नमुना बुडू द्या.
· एकदा द्रव डोक्यासह नमुन्याचा शेवटचा थेंब, द्रव दुसर्‍या टप्प्यावर जाईल, हळूहळू द्रव हालचाल वाढवेल, बफरच्या बाहेर जा

अनुलंब गोंद नमुना कसा करावा?

· काचेच्या दोन तुकड्यांमध्ये तयार केलेले अनुलंब गोंद बिंदू नमुना छिद्र. अत्यंत पातळ गोंद मध्ये, दोन काचेच्या प्लेट्समध्ये पिपेट डोके देखील घातले जाऊ शकत नाही. ग्लिसरिन पहा! नमुना भोक वर पिपेटचे डोके ठेवा आणि नमुना भोकात बुडेल.
· पॉईंट नमुना आधी, पॉलीप्रॉपिलिन yl सिल जेल जेल नमुना भोक स्वच्छ स्वच्छ धुवावा अशी खात्री करा. नमुना छिद्राच्या तळाशी दिसू शकणारे पाणी आणि पाणी धुवा. पाणी नमुना छिद्र लक्षणीय लहान बनवू शकते. 25 मिली किंवा 50 मिलीलीटर सिरिंज आणि 18-गेज सुई वापरा. इलेक्ट्रोफोरेसीस बफरमध्ये घाला आणि काळजीपूर्वक नमुना भोक फ्लश करा.
Sample नमुना छिद्र पाहणे अवघड आहे, परंतु त्याचप्रमाणे, उर्वरित सोपे आहे. जर जास्त छिद्र असतील तर, नमुना बफरची चाचणी ब्रोमोफेनॉल निळ्यासह केली जाऊ शकते.