पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी खबरदारी

· polyacrylamidegel आवश्यक आहे acrylamide monomer, polymerization प्रारंभिक साहित्य, उत्प्रेरक, आणि मीठ आणि बफर मिश्रण एकत्र.

· acrylamideआणि BIS (N, N'- methylene double acrylamide) हे मोनोमर फॉर्म जेल मॅट्रिक्स आहे.

· अमोनियम पर्सल्फेट चिकट पॉलिमरायझेशन प्रक्रिया सुरू करते. गोंद तयार करण्यासाठी पाण्यात तयार केलेले 10% अमोनियम पर्सल्फेट द्रावण आवश्यक आहे. बहुतेक माहिती सक्रिय वापराची आवश्यकता दर्शवते. तथापि, 10% द्रावण 4℃ वर अनेक आठवडे ॲक्टिव्हिटीमध्ये लक्षणीय नुकसान न होता ठेवता येते. 10 मिली पर्यंत बनवा आणि गोंद एकत्रित न झाल्यास टाकून द्या.

टीप: ची टक्केवारीacrylamideसिक्वेन्सिंग ग्लू आणि प्रोटीन ग्लूमध्ये समान नाही. प्रीमेड ऍक्रिलामाइड वापरत असल्यास: BIS सोल्यूशन, योग्य बाटली मिळाल्याची खात्री करा.

· TEMED (N, N, N ', N' - टेट्रामेथाइल इथिलेनेडिअमिन) रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवलेल्या तपकिरी बाटलीमध्ये एक उत्प्रेरक आहे. गोंद ओतण्यापूर्वी जोडा.

· इलेक्ट्रोफोरेसीसमध्ये वापरलेली पॉलीएक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसीस ग्लास प्रत्येक वेळी आधी आणि नंतर धुवावी. इलेक्ट्रोफोरेसीसनंतर, गरम साबणाच्या पाण्यात मऊ ब्रश आणि कापडाने धुवा, डिस्टिल्ड पाण्याने स्वच्छ धुवा आणि कोरडे होण्यासाठी उभे रहा.

· पोकळ पॉलिमरमुळे ओलावा आणि धूळ होऊ शकते. इलेक्ट्रोफोरेसीस करण्यापूर्वी, ग्लास प्लेट ग्लास क्लिनरने स्वच्छ करा आणि मऊ ब्रशने पुसून टाका. डिस्टिल्ड पाण्याने धुवा आणि कागदाच्या पुसण्याने चांगले कोरडे करा. कागदाने पुसण्यापूर्वी 70% इथेनॉलने स्वच्छ धुवल्याने स्वच्छ होण्यास आणि कोरडे होण्यास गती मिळते. ऍक्रिलामाइडचे नमुने क्रमशः जोडा: BIS, पाणी, बफर सोल्यूशन, अमोनियम पर्सल्फेट, TEMED. चांगले हलवा आणि लगेच ओतणे.

पॉलिमरायझेशनपूर्वी पॉलीएक्रिलामाइड डिगॅस करणे आवश्यक नाही. (ॲक्रिलामाइड फुगे काढण्यासाठी व्हॅक्यूममध्ये ठेवले जायचे कारण ऑक्सिजन पॉलिमरायझेशनला प्रतिबंधित करते.)

क्षैतिज गोंद बिंदू नमुना टिपा.

· तळाच्या चौकटीत काळ्या कागदाचा तुकडा, काळी पार्श्वभूमी अधिक स्पष्टपणे पाहण्यासाठी काही नमुना छिद्र करा.
· गोंद टाकी भरलेले बफर, अगदी कोलॉइडवर.
· काठावर प्रकाश असल्यास, दिवे चालू करा, कोलॉइडचा प्रकाश चमकू द्या. नमुना पिपेटमध्ये काढा.
· स्वयंचलित पाइपिंग उपकरण वापरणे.
· 10-200 mu मध्ये 1 लिक्विड मूव्हिंग पॉइंट नमुन्यावरील बहुतेक बिंदूंमध्ये वापरला जाऊ शकतो. अगदी लहान नमुन्याच्या छिद्रांसाठी (10μ1 पेक्षा कमी), सिक्वेन्सिंग ग्लूसाठी वापरलेले लांब पिपेट हेड अधिक सोयीस्कर आहे.

· नमुन्यात नुकतेच बुडवलेले पाइपिंग, हळूहळू हलणारे द्रव श्वास घेत आहे. नमुना ग्लिसरीनने चिकट दिसू शकतो आणि जलद पंपिंगमुळे पिपेटच्या डोक्यात हवेचे फुगे येऊ शकतात.

· पाइपिंग हेड इनहेल केल्यानंतर नमुने, द्रव डोके पाईपच्या काठावर हलके हलवतात किंवा कागद पुसून द्रव डोके थेंबांच्या बाहेर चोखतात. नमुना चोखणार नाही याची काळजी घ्या.

नमुना छिद्रात नमुना ठेवा

· थोडासा दाब ठेवण्यासाठी पाइपिंग यंत्र, नमुने थोडेसे ओव्हरफ्लो लिक्विड हेड हलवा.
· बफरमध्ये घातलेले पाइपिंग हेड, स्पॉट होलपेक्षा किंचित जास्त, सकारात्मक दाब राखते. पिपेटची टीप एका लहान छिद्रात घातली जाऊ शकते.
· हळूहळू आणि स्थिरपणे नमुने बाहेर. पिपेटची टीप पॉइंट सॅम्पल होलच्या वर ठेवली जाते आणि नमुना छिद्रात बुडेल. आत ढकलण्याऐवजी नमुना छिद्र भरण्यासाठी नमुना बुडू द्या.
· एकदा लिक्विड हेडसह नमुन्याचा शेवटचा थेंब झाल्यावर, द्रव दुसऱ्या पायावर जाईल, हळूहळू द्रव हलवा, बफरच्या बाहेर जा

उभ्या गोंद सॅम्पलिंग कसे करावे?

· उभ्या गोंद बिंदू नमुना छिद्रे काचेच्या दोन तुकड्यांमध्ये तयार होतात. अतिशय पातळ गोंद मध्ये, पिपेट डोके दोन काचेच्या प्लेट्समध्ये देखील घातले जाऊ शकत नाही. ग्लिसरीन पहा! नमुना छिद्रावर विंदुक डोके ठेवा आणि नमुना छिद्रात बुडेल.
· बिंदू नमुना आधी, polypropylene acyl gel नमुना भोक उभ्या बिंदू ठेवणे खात्री करा स्वच्छ rinsed आहे. अनपॉलिमराइज्ड ऍक्रिलामाइड आणि सॅम्पल होलच्या तळाशी दिसणारे पाणी धुवा. पाणी नमुना भोक लक्षणीय लहान करू शकता. 25 मिली किंवा 50 मिली सिरिंज आणि 18-गेज सुई वापरा. इलेक्ट्रोफोरेसीस बफरमध्ये घाला आणि नमुना छिद्र काळजीपूर्वक फ्लश करा.
· नमुना छिद्र पाहणे कठीण आहे, परंतु त्याच वेळी, बाकीचे सोपे आहे. जास्त छिद्रे असल्यास, नमुना बफर ब्रोमोफेनॉल निळ्यासह तपासला जाऊ शकतो.