· पॉलीअ‍ॅक्रिलामाइडजेल हे अ‍ॅक्रिलामाइड मोनोमर, पॉलिमरायझेशन सुरू करणारे साहित्य, उत्प्रेरक आणि मीठ आणि बफर मिश्रणाचा उजवा भाग एकत्र करून तयार करावे लागेल.
· अ‍ॅक्रिलामाइडआणि BIS (N, N '- मिथिलीन डबल अ‍ॅक्रिलामाइड) हे मोनोमर फॉर्म जेल मॅट्रिक्स आहे.
· अमोनियम पर्सल्फेट चिकटवण्याची प्रक्रिया सुरू करते. गोंद तयार करण्यासाठी पाण्यात तयार केलेले १०% अमोनियम पर्सल्फेट द्रावण आवश्यक असते. बहुतेक माहिती सक्रिय वापराची आवश्यकता दर्शवते. तथापि, १०% द्रावण ४℃ वर अनेक आठवडे ठेवता येते, कोणत्याही हालचालीत लक्षणीय घट न होता. १० मिली पर्यंत बनवा आणि गोंद एकत्र न होता टाकून द्या.
टीप: टक्केवारीअ‍ॅक्रिलामाइडसिक्वेन्सिंगमध्ये ग्लू आणि प्रोटीन ग्लू सारखे नसतात. जर तुम्ही प्रीमेड अ‍ॅक्रिलामाइड: बीआयएस सोल्यूशन वापरत असाल, तर योग्य बाटली घ्या.
· TEMED (N, N, N ', N ' - टेट्रामिथाइल इथिलेनेडायमाइन) हे एक उत्प्रेरक आहे, एका तपकिरी बाटलीत, रेफ्रिजरेटरमध्ये ठेवलेले. गोंद ओतण्यापूर्वी लगेच घाला.
· इलेक्ट्रोफोरेसिसमध्ये वापरलेला पॉलीअ‍ॅक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसिस ग्लास प्रत्येक वेळी आधी आणि नंतर धुवावा. इलेक्ट्रोफोरेसिसनंतर, गरम साबणाच्या पाण्यात मऊ ब्रश आणि कापडाने धुवा, डिस्टिल्ड वॉटरने स्वच्छ धुवा आणि वाळवा.
· पोकळ पॉलिमरमुळे ओलावा आणि धूळ होऊ शकते. इलेक्ट्रोफोरेसिस करण्यापूर्वी, काचेची प्लेट काचेच्या क्लिनरने स्वच्छ करा आणि मऊ ब्रशने पुसून टाका. डिस्टिल्ड पाण्याने धुवा आणि पेपर वाइपने पूर्णपणे वाळवा. कागदाने पुसण्यापूर्वी ७०% इथेनॉलने धुवून स्वच्छ होण्यास आणि वाळवण्यास मदत होते. अ‍ॅक्रिलामाइडचे नमुने क्रमाने जोडा: BIS, पाणी, बफर सोल्यूशन, अमोनियम पर्सल्फेट, TEMED. चांगले हलवा आणि लगेच ओता.
पॉलिमरायझेशनपूर्वी पॉलीअ‍ॅक्रिलामाइड डीगॅस करणे आवश्यक नाही. (ऑक्सिजन पॉलिमरायझेशनला प्रतिबंधित करते म्हणून बुडबुडे काढण्यासाठी अ‍ॅक्रिलामाइड व्हॅक्यूममध्ये ठेवले जात असे.)
क्षैतिज गोंद बिंदू नमुना टिपा.
· खालच्या बॉक्समध्ये काळ्या कागदाचा तुकडा ठेवा, काळ्या पार्श्वभूमीवर काही नमुना छिद्र करा जेणेकरून ते अधिक स्पष्टपणे दिसेल.
· गोंद टाकीने भरलेला बफर, कोलॉइडच्या अगदी वर.
जर काठावर दिवा असेल तर दिवे चालू करा, कोलाइडला प्रकाश द्या. नमुना पिपेटमध्ये काढा.
· स्वयंचलित पाईपेटिंग उपकरण वापरणे.
· १०-२०० mu मध्ये १ द्रव हालचाल बिंदू नमुन्यावरील बहुतेक बिंदूंमध्ये वापरला जाऊ शकतो. खूप लहान नमुना छिद्रांसाठी (१०μ१ पेक्षा कमी), गोंद अनुक्रमित करण्यासाठी वापरलेला लांब पिपेट हेड अधिक सोयीस्कर आहे.
· नमुन्यात नुकतेच बुडवलेले पाईपेटिंग, हळूहळू हलणारे द्रव श्वासाने आत घेणे. नमुना ग्लिसरीनने चिकट दिसू शकतो आणि जलद पंपिंगमुळे पिपेटच्या डोक्यात हवेचे फुगे येऊ शकतात.
· पाईपेटिंग हेड इनहेल केल्यानंतर, नमुने पाईपच्या काठावर किंवा पुसण्याच्या कागदाच्या कडेला द्रवपदार्थाचे डोके हलक्या हाताने हलवतील आणि थेंबांच्या बाहेर द्रवपदार्थाचे डोके शोषतील. नमुना शोषला जाणार नाही याची काळजी घ्या.
नमुना नमुना छिद्रात ठेवा.
· पाईपेटिंग डिव्हाइस जेणेकरून थोडासा दाब राहील, नमुने ओव्हरफ्लो लिक्विड हेड किंचित हलतील.
· बफरमध्ये घातलेले पाईपेटिंग हेड, स्पॉट होलपेक्षा थोडेसे उंच, सकारात्मक दाब राखते. पाईपेटची टीप एका लहान छिद्रात घातली जाऊ शकते.
· हळूहळू आणि स्थिरपणे नमुने बाहेर काढा. पाईपेटची टीप पॉइंट सॅम्पल होलच्या वर ठेवली जाते आणि नमुना त्या होलमध्ये बुडेल. सॅम्पल होल आत ढकलण्याऐवजी भरण्यासाठी सॅम्पल बुडेल.
· द्रव डोक्यासह नमुनाचा शेवटचा थेंब पडताच, द्रव दुसऱ्या पायावर जाईल, हळूहळू द्रव हालचाल वाढवेल, बफरमधून बाहेर पडेल.
उभ्या गोंदाचे नमुने कसे घ्यावेत?
· दोन काचेच्या तुकड्यांमध्ये उभ्या गोंद बिंदूच्या नमुना छिद्रे तयार होतात. अतिशय पातळ गोंदात, पिपेट हेड दोन काचेच्या प्लेट्समध्ये देखील घालता येत नाही. ग्लिसरीनकडे लक्ष द्या! पिपेट हेड नमुना छिद्रावर ठेवा आणि नमुना छिद्रात बुडेल.
· पॉइंट सॅम्पल घेण्यापूर्वी, पॉलीप्रोपायलीन अ‍ॅसिल जेल सॅम्पल होलचा उभा पॉइंट स्वच्छ धुवून टाका. पॉलिमराइज्ड अ‍ॅक्रिलामाइड आणि सॅम्पल होलच्या तळाशी दिसणारे पाणी धुवा. पाण्यामुळे सॅम्पल होल लक्षणीयरीत्या लहान होऊ शकतो. २५ मिली किंवा ५० मिली सिरिंज आणि १८-गेज सुई वापरा. इलेक्ट्रोफोरेसीस बफरमध्ये ओता आणि सॅम्पल होल काळजीपूर्वक फ्लश करा.
· नमुना छिद्र पाहणे कठीण असू शकते, परंतु त्याच वेळी, बाकीचे सोपे आहे. जर जास्त छिद्रे असतील तर नमुना बफर ब्रोमोफेनॉल ब्लूने तपासला जाऊ शकतो.
पोस्ट वेळ: मार्च-३१-२०२३